Acetylcholinesterase (Ache)

Les essais utilisant l’AChE sont développés avec le réactif d’Ellman, qui contient de l’acétylthiocholine comme substrat. Le produit final de la réaction enzymatique (acide 5-thio-2-nitrobenzoïque), est jaune vif et peut être lu à 405-414 nm.

L’utilisation de l’AChE comme marqueur enzymatique pour ELISA est brevetée par le CEA, et Bertin Bioreagent possède l’expertise pour développer et produire des kits ELISA utilisant cette technologie.

Structure d’une acétylcholinestérase humaine (Kryger et al 2000)

L’AChE présente plusieurs avantages par rapport aux enzymes classiquement utilisées en ELISA :

Supériorité cinétique et haute sensibilité : AChE montre une véritable cinétique de premier ordre avec un taux de conversion de 64 000 sec-1. C’est presque 3 fois plus rapide que la HRP (horseradish peroxydase) ou l’AP (alkaline phosphatase). L’AChE permet une plus grande sensibilité que les autres enzymes de marquage.

Faible bruit de fond : l’hydrolyse non enzymatique de l’acétylthiocholine dans le tampon est pratiquement absente. Ainsi, l’AChE permet un bruit de fond très faible et un rapport signal/bruit accru par rapport à d’autres substrats d’enzymes, qui sont intrinsèquement instables.

Large gamme dynamique : l’AChE est une enzyme stable et son activité reste constante pendant de nombreuses heures car, contrairement à d’autres enzymes, son substrat n’inhibe pas son activité. Cela permet des dosages simultanés d’échantillons très dilués et très concentrés.

Polyvalence : l’AChE est une enzyme totalement stable, contrairement à la HRP qui est inactivé par inhibition « suicide » . Ainsi, si une plaque tombe accidentellement après l’ajout du substrat AChE (réactif d’Ellman), il suffit de laver la plaque, d’ajouter du réactif d’Ellman frais et de procéder à un nouveau développement. Alternativement, la plaque peut être conservée à +4°C en attendant l’avis du support technique.